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上海四步完成RNA提取试剂盒QQ 804036498 **** 上海朝瑞生物科技供应

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所在地: 上海市
***更新: 2020-08-26 17:18:01
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产品详细说明


 


RNA 常用提取方法(1)

1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法:

     原理:使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效制抑RN A 酶的活性,上海四步完成RNA提取试剂盒QQ 804036498,经过起始密度为1.78g/m l 的氯化铯介质,进行密度梯度超速离心,RNA沉淀于管底,而DNA与蛋白质在上清中。使用这种方法,不但能得到高质量的RNA ,而且能同时分离出细胞染色体DNA。

   

2、盐酸胍-有机溶剂法:

     原理:本法有MacDonald1987年在Strohman报道的方法基础上改进而成的,适用于没有超速离心及设备的情况下提取细胞总RNA。它利用盐酸胍制抑RNA酶,匀浆裂解细胞,有机溶剂抽提去除蛋白质,通过选择性沉淀RNA分子而去除DNA。

     

3、氯化锂-尿素法:

     原理:本法首先由Auffray报道,利用高浓度尿素变性蛋白质同时制抑RNA酶,上海四步完成RNA提取试剂盒QQ 804036498,3 mol/L LiCl选择性沉淀RNA。 

      



同时,上海四步完成RNA提取试剂盒QQ 804036498,由于成本高昂、医学证据弱,使得基因测序在临床应用存在明显的瓶颈。上海四步完成RNA提取试剂盒QQ 804036498

本产品中含有苯酚,具0性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会引起中毒、灼伤及其他身体伤害。使用时应穿戴防护服装、手套、面罩等防护物。如果不小心接触到眼睛时,应立即用大量水冲洗然后前往医院进行***。

请穿实验服并佩戴一次性手套进行实验操作,避免 RNase 污染。

使用 RNase-free 的塑料制品和***头避免交叉污染;所有离心管及相关溶液都必须无 RNA 酶污染。

请自备氯仿、异丙醇(新开封或提取 RNA **)、75%乙醇(DEPC 处理水配制)、DEPC 和 DEPC 处理水。

使用冻存的细胞或组织抽提总 RNA 的效果通常会比新鲜的细胞或组织差一些,因为冻存过程中细胞或组织内的 RNase 会释放出来并剪切样品。推荐:如果不能及时抽提 RNA,先加入适量 Trizol 试剂,裂解样品然后再冻存,这样 RNase 就不会降解样品。 上海四步完成RNA提取试剂盒QQ 804036498将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。

缓慢加入0.5 倍体积无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到溶液和沉淀一起转入纯化柱中,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,若一次不能将全部溶液和混合物加入纯化柱,请分两次转入纯化柱中,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃掉收集管中的废液。

向纯化柱中加入500 μl 溶液 RPI(使用前请先检查是否已加入乙醇),4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃废液。

 向纯化柱中加入500 μl 溶液 RW(使用前请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃废液。

 向纯化柱 中加入500 μl 溶液 RW,室温静置2 分钟,4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,去除残余液体。

将纯化柱入2ml 收集管中,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min,去除残余液体。

样品处理

组织:将组织在液氮中磨碎。每 50–100 mg 组织加1 ml 溶液 RL,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液RZ 体积的十分之一。

 单层培养细胞:直接在培养板中加入裂解液RZ 裂解细胞,每10 cm2 面积加1 ml溶液 RL。用取样器抽打几次。

注意:溶液 RL 的加入量根据培养瓶面积决定,不是由细胞数决定。如果加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。

 细胞悬液:离心取细胞,弃上清。每5–10×106 动物细胞和植物细胞加入1 ml 溶液 RL。加溶液 RL 前不要洗涤细胞,以免降解mRNA。

将匀浆样品在15–30℃放置5 min,使得核酸蛋白复合物完全分离。 ***由专业人员对数据进行解读、分析,得出报告。

意:此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除,离心后将纯化柱在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。

 将纯化柱转入一个新的离心管中,加30–100 μl RNase-free ddH2O,室温放置2 min,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。

洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。

注意:如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液。 加入吸附柱静置2分钟,2-8 12000rpm ℃ 离心2min,弃废液。江苏四步完成RNA提取试剂盒哪家强

实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。上海四步完成RNA提取试剂盒QQ 804036498

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上海朝瑞生物科技有限公司位于上海市,创立于2003-01-22。公司业务分为科研技术服务,应用技术服务,科研成果转化,科学产品销售等,目前不断进行创新和服务改进,为客户提供质量的产品和服务。公司从事化工多年,有着创新的设计、强大的技术,还有一批**的专业化的队伍,确保为客户提供质量的产品及服务。公司立足于全国市场,依托强大的研发实力,融合世界前沿的技术理念,飞快响应客户的变化需求。

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